高效液相色譜儀是一種基于色譜技術(shù)的分析儀器,具有高分離能力、高靈敏度和廣泛的應(yīng)用范圍。它在化學(xué)、生物、制藥、環(huán)境和食品等領(lǐng)域中扮演著重要的角色?;谝合嗌V技術(shù),通過樣品在固定相上的分配和吸附作用來實(shí)現(xiàn)分離。它利用高壓泵將流動相(溶劑)推動通過色譜柱,樣品溶液通過柱時,不同成分因?yàn)樵诠潭ㄏ嗌系南嗷プ饔昧Σ煌蛛x出來。通過調(diào)整流動相的性質(zhì)和梯度條件,可以實(shí)現(xiàn)對復(fù)雜樣品的高效分離。
高效液相色譜儀其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)主要體現(xiàn)在以下幾個方面:
1、高壓輸液系統(tǒng):
HPLC采用高壓泵來推動流動相通過色譜柱,以實(shí)現(xiàn)快速、高效的分離。高壓泵的輸出壓力通常在4.7×10^7Pa至4.4×10^7Pa之間,流速可調(diào)且穩(wěn)定。這種高壓輸液方式能夠降低樣品在色譜柱中的擴(kuò)散效應(yīng),加快其在柱中的移動速度,從而提高分辨率和回收率。
2、進(jìn)樣系統(tǒng):
進(jìn)樣系統(tǒng)一般采用隔膜注射進(jìn)樣器或高壓進(jìn)樣間完成進(jìn)樣操作,進(jìn)樣量恒定,有助于提高分析樣品的重復(fù)性。進(jìn)樣器應(yīng)具有微量進(jìn)樣功能,且進(jìn)樣操作簡便、快速。常見的進(jìn)樣方式包括閥進(jìn)樣和自動進(jìn)樣器裝樣。
3、色譜柱:
色譜柱是HPLC的核心部件,用于分離樣品中的各組分。色譜柱內(nèi)部填充有固定相,不同組分在固定相和流動相之間的分配系數(shù)不同,從而實(shí)現(xiàn)分離。色譜柱的長度一般為10~50cm,內(nèi)徑為2~5mm,由優(yōu)質(zhì)不銹鋼或厚壁玻璃管等材料制成。固定相的粒度通常為5~10μm,具有高柱效但會引起高阻力。
4、檢測系統(tǒng):
檢測器將色譜柱連續(xù)流出的樣品組分轉(zhuǎn)變成易于測量的電信號,被數(shù)據(jù)系統(tǒng)接收并得到樣品分離的色譜圖。常見的檢測器有紫外-可見光檢測器、熒光檢測器、電導(dǎo)檢測器等,可根據(jù)不同物質(zhì)的吸收、發(fā)射或電導(dǎo)特性進(jìn)行檢測。
5、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng):
數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)用于處理記錄儀記錄的信號,進(jìn)行色譜峰識別、定量和定性分析等。該系統(tǒng)應(yīng)具有強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理能力和友好的用戶界面。
6、其他輔助系統(tǒng):
包括流動相儲存器、脫氣器、梯度洗脫裝置等。流動相儲存器用于儲存流動相,通常為高壓密封容器,可確保流動相的純度和穩(wěn)定性。脫氣器用于防止流動相從色譜柱內(nèi)流出時釋放出氣泡進(jìn)入檢測器,從而引起噪聲。梯度洗脫裝置可在分離過程中通過逐漸改變流動相的組成增加洗脫能力。